Preparación de medio de cultivo kligler

En esta práctica lo que hacemos es preparar el medio de cultivo kligler Hierro Agar en tubos de ensayo para posteriormente hacer una siembra.

Para comenzar voy a poner un poco de información sobre Kligler Hierro Agar.
Medio de cultivo frecuentemente usado en microbiología de alimentos para la diferenciación de enterobacterias, en base a la fermentación de glucosa y lactosa, y a la producción de ácido sulfhídrico.

FUNDAMENTO

En el medio de cultivo, la peptona de carne y la tripteína, aportan los nutrientes adecuados para el desarrollo bacteriano. La lactosa y la glucosa son los hidratos de carbono fermentables. El tiosulfato de sodio es el sustrato necesario para la producción de ácido sulfhídrico, el citrato de hierro y amonio, es la fuente de iones Fe 3+, los cuales se combinan con el ácido sulfhídrico y  producen sulfuro de hierro, de color negro. El rojo de fenol es el indicador de pH, y el cloruro de sodio mantiene el balance osmótico. El agar es el agente solidificante. Por fermentación de azúcares, se producen ácidos, que se detectan por medio del indicador rojo de fenol, el cual vira al color amarillo en medio ácido. El tiosulfato de sodio se reduce a sulfuro de hidrógeno el que reacciona luego con una sal de hierro proporcionando el típico sulfuro de hierro de color negro.

PROCEDIMIENTO

Como nos indica en las instrucciones se coge 54,8 gramos del producto por litro de agua destilada. Nosotros hemos cogido 400 ml por lo que equivale a 21,92 gramos.

Echamos los 21,92 gramos en un matraz enlermeyer con los 400 ml e agua. Previamente hemos pesado esos 21,92 gramos en una báscula, echándolo en un vidrio de reloj con una cuchara metálica.

Una vez tenemos todo en el matraz enlermeyer lo ponemos en una estufa agitadora con un imán, para que se vaya calentando y se vaya disolviendo bien. Cuando ya sea una mezcla homogénea lo pasamos a un cazo para calentarlo más rápido, cuando llegue a 100º C lo dejamos 1 min en ebullición y lo retiramos.

Después lo dejamos que se atempere un poco y procedemos a llenar los tubos de ensayos con la protección de un guante térmico hasta la mitad más o menos y los dejamos inclinados, apoyados en la gradilla. Cuando enfríen un poco los metemos al frigorífico y al día siguiente haremos la siembra.

Adjunto imágenes de todo el proceso: